Fluorescenčná mikroskopia spôsobila revolúciu v našej schopnosti vizualizovať a študovať biologické vzorky, čo nám umožňuje ponoriť sa do zložitého sveta buniek a molekúl.Kľúčovým komponentom fluorescenčnej mikroskopie je svetelný zdroj používaný na excitáciu fluorescenčných molekúl vo vzorke.V priebehu rokov sa používali rôzne svetelné zdroje, z ktorých každý má svoje jedinečné vlastnosti a výhody.
1. Ortuťová lampa
Vysokotlaková ortuťová výbojka s výkonom od 50 do 200 wattov je vyrobená z kremenného skla a má guľovitý tvar.Vo vnútri obsahuje určité množstvo ortuti.Keď funguje, medzi dvoma elektródami dochádza k výboju, ktorý spôsobuje odparovanie ortuti a vnútorný tlak v guli sa rýchlo zvyšuje.Tento proces zvyčajne trvá približne 5 až 15 minút.
Emisia vysokotlakovej ortuťovej výbojky je výsledkom dezintegrácie a redukcie molekúl ortuti počas výboja elektródy, čo vedie k emisii svetelných fotónov.
Vyžaruje silné ultrafialové a modrofialové svetlo, vďaka čomu je vhodný na vzrušujúce rôzne fluorescenčné materiály, a preto je široko používaný vo fluorescenčnej mikroskopii.
2. Xenónové výbojky
Ďalším bežne používaným zdrojom bieleho svetla vo fluorescenčnej mikroskopii je xenónová lampa.Xenónové výbojky, podobne ako ortuťové výbojky, poskytujú široké spektrum vlnových dĺžok od ultrafialových až po blízke infračervené.Líšia sa však svojimi excitačnými spektrami.
Ortuťové výbojky sústreďujú svoju emisiu do oblasti blízkej ultrafialovej, modrej a zelenej, čo zaisťuje generovanie jasných fluorescenčných signálov, ale prichádza so silnou fototoxicitou.V dôsledku toho sú lampy HBO zvyčajne vyhradené pre fixné vzorky alebo slabé fluorescenčné zobrazovanie.Naproti tomu zdroje xenónových výbojok majú hladší profil budenia, čo umožňuje porovnávanie intenzity pri rôznych vlnových dĺžkach.Táto charakteristika je výhodná pre aplikácie, ako je meranie koncentrácie iónov vápnika.Xenónové výbojky tiež vykazujú silné budenie v blízkom infračervenom rozsahu, najmä okolo 800-1000 nm.
Lampy XBO majú oproti žiarovkám HBO nasledujúce výhody:
① Jednotnejšia spektrálna intenzita
② Silnejšia spektrálna intenzita v infračervených a stredných infračervených oblastiach
③ Väčší energetický výstup, ktorý uľahčuje dosiahnutie otvoru objektívu.
3. LED diódy
V posledných rokoch sa v oblasti svetelných zdrojov fluorescenčnej mikroskopie objavil nový uchádzač: LED diódy.LED diódy ponúkajú výhodu rýchleho zapínania a vypínania v priebehu milisekúnd, čím sa skracuje čas expozície vzorky a predlžuje sa životnosť jemných vzoriek.Okrem toho LED svetlo vykazuje rýchly a presný rozpad, čo výrazne znižuje fototoxicitu počas dlhodobých experimentov so živými bunkami.
V porovnaní so zdrojmi bieleho svetla LED diódy zvyčajne vyžarujú v rámci užšieho excitačného spektra.K dispozícii je však viacero pásiem LED, ktoré umožňujú všestranné viacfarebné fluorescenčné aplikácie, vďaka čomu sú LED diódy čoraz obľúbenejšou voľbou v moderných zostavách fluorescenčnej mikroskopie.
4. Laserový svetelný zdroj
Zdroje laserového svetla sú vysoko monochromatické a smerové, vďaka čomu sú ideálne pre mikroskopiu s vysokým rozlíšením, vrátane techník s vysokým rozlíšením, ako je STED (Stimulated Emission Depletion) a PALM (Photoactivated Localization Microscopy).Laserové svetlo sa zvyčajne vyberá tak, aby zodpovedalo špecifickej excitačnej vlnovej dĺžke požadovanej pre cieľový fluorofór, čo poskytuje vysokú selektivitu a presnosť pri fluorescenčnej excitácii.
Výber svetelného zdroja fluorescenčného mikroskopu závisí od špecifických experimentálnych požiadaviek a vlastností vzorky.Ak potrebujete pomoc, neváhajte nás kontaktovať
Čas odoslania: 13. septembra 2023